显微镜视野

如何计算显微镜下视野面积

在显微镜下进行病理读片,是病理医师工作中的重要内容之一。显微镜观察和记录的结果是临床诊断的科学依据。正确标准的使用显微镜,观察和记录读片结果才具有科学性。众所周知,显微镜的成像首先是由物镜对标本放大成像,然后由目镜一次放大被人们肉眼观察到。所能呈现图像的视野大小是由目镜的视场数决定的。需要说明的是,本篇所阐述的观察和记录,仅限于通过目镜的显微镜观察和记录。不经目镜观察的其他光路采集记录图像,如CCD、数码相机、由软件操作采集图像等另述。

显微镜目镜的视场数(fieldnumber,FN)不同,镜下能看到的视野大小就不同,不同的面积区域对镜下阳性率计数有影响,我们应该了解目镜视数与视场面积的关系。视场数小能看到的视场面积就小,反之,视场数大则能看见的视场面积就大。

• 目镜视场数的标识

显微镜设计和生产具有国际化标准,在显微镜的目镜上都会标识视场数,如奥林巴斯BX50型显微镜,目镜视场数22(22数值前的英文和数字标识是目镜分类名和倍率)。

• 实际视场和计算公式

在标本平面上,显微镜能够观察到的区域(圆形区域)叫做实际视场,也称视野。用以下公式计算可得知面积大小。

实际视场 = 视场数 / 视场数物镜的倍率（中间倍率）

一般显微镜产品,都有其标准配置。如奥林巴斯显微镜BX51,标准配置视场数22的目镜,如果使用40物镜观察,其视场面积计算如下:

实际视场(直径d)=22(视野数)/40X(物镜倍率)=0.55mm

实际视场(面积s)：πr² = π1/4d² =3.14×1/4(0.55)²=0.2375mm²≈0.24mm²

那么,我们可以确定当前观察用显微镜的视场面积是0.24mm²。 需要说明,虽然各显微镜生产厂家不同型号的显微镜有其标准配置,但是,我们只需要识别显微镜目镜上的标识就可以知道显微镜的视场面积。

• 物镜倍率

物镜是用于显微镜成像的重要光学部件。生物显微镜常用物镜倍率有4 、10 、20 、40 和100。病理学计数常用的高倍物镜是指40。

• 中间倍率

直接通过目镜观察无需考虑中间倍率。

中间倍率是指加在光路中的CCD接口、摄影目镜以及CCD元件等的倍率。因为现在使用的显微镜大都是无限远成像系统,附加有荧光观察、本差观察、微分干涉观察等,元件不会改变倍率,不需要考虑。

• 常用目镜下的视场面积

最常用目镜视场数是22。各显微镜制造商相继设计生产有视场数是25的宽视场目镜,视场数是26.5的超宽视场目镜。也有视场数是18、20的较小视场数的目镜。笔者将常用目镜分别在高倍(40)物镜下观察时,计算其面积如下表所示,方便显微镜使用者参考。